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紫外可見分光光度計的基本工作原理類似于紅外光譜儀。一定頻率的紫外可見光用于照射待分析的有機物質，引起分子中價電子的轉變，其將被選擇性地吸收。作為波長函數吸收的一組光譜反映了樣品的特征。在紫外可見分光光度計范圍內，對于特定波長，吸收程度與樣品中組分的濃度成比例，因此可以定性分析測量的光譜，并且可以基于吸收和已知濃度來比較測量的光譜標準、定量分析。